刘占民 鞠雷 王晓丹
(1. 河北农业大学中兽医学院，河北 定州 073000
2. 河北农业大学动物科技学院，河北 保定 071001)
中药水飞蓟为菊科植物水飞蓟Silybum marianum (L) Gaertn的干燥成熟果实，味苦，性凉；归肝、胆经。具有清热解毒、疏肝利胆的功能，主要用于肝胆湿热，胁痛，黄疸[1]。原产于南欧和北非，其植物学的显著特征是叶表面有明显的乳白色斑纹,所以又名乳蓟[Milk thisthe]。水飞蓟是欧洲民间的一种草药,用于保肝。我国于1972年从西德引种紫花水飞蓟，现已在陕西、黑龙江、辽宁、盘锦、北京等地种植[2]。早期的研究表明,水飞蓟素作为抗肝损伤药物,具有稳定细胞膜,改善肝功能的作用,对急慢性肝炎、肝硬变和代谢中毒性肝损伤具有较好的疗效[3]。扑热息痛(Paracetamol, Par)即对乙酰氨基酚(acetaminphen, AP)为临床常用的解热镇痛药。然而,大剂量应用则可引起动物和人严重肝肾损伤甚至死亡。水飞蓟素难溶于水，是水飞蓟发挥保肝作用的主要成分。水飞蓟的水溶性成分对肝损伤是否具有保护作用，这方面进行的研究还很少。本试验利用扑热息痛所致肝损伤作为肝损模型,研究水飞蓟煎剂保肝作用的强弱。
1 材料和方法
1.1 动物
30只23g左右的ICR小鼠，雌雄各半，本校李相运教授惠赠。
1.2 药物和试剂
水飞蓟购自河北安国药市，经鉴定为正品，水煎两次过滤，合并滤液，浓缩至1g生药/ml。扑热息痛（河北冀衡药业有限公司），使用时40℃生理盐水溶解，浓度30mg/ml。ALT、AST、MDA、GSH测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。考马斯亮兰购自河北保定海泰克生物技术有限公司。
1.3 主要仪器
756P型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)；722E型可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)；HH-4数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）；YXJ-2高速离心机（常州国华电器有限公司）。
1.4 试验方法
扑热息痛肝损伤模型参照文献[4]并结合预试验结果进行。健康ICR小鼠随机分为正常组、扑热息痛模型组、扑热息痛加0.2ml药液组、扑热息痛加0.4ml药液组、扑热息痛加0.6ml药液组。正常组和模型组灌服0.4ml生理盐水，其它组按既定药物剂量灌胃， 1次/d，连续灌5d，最后1次灌药后8h，正常组腹腔注射0.4ml生理盐水，其它组腹腔注射0.4ml（600mg/kg）扑热息痛溶液。腹腔注射16h后称量小鼠体重，眼球采血，颈椎脱臼处死小鼠。血样4000r.p.m.离心15min，取血清。剖腹取完整肝称重，取肝左叶一部分，用Bouin’s液固定；肝右叶一部分称重，用冰生理盐水制成10％肝组织匀浆，备用。
1.5 测定指标及方法
肝体重指数计算方法为：
肝体重指数＝肝重（mg）/体重（g）
按试剂盒说明书测定肝组织匀浆中MDA（丙二醛）、GSH（谷胱甘肽）的含量，以及小鼠血清中ALT（丙氨酸氨基转移酶，GPT）、AST（天门冬氨酸氨基转移酶，GOT）的含量。
2. 病理组织学观察
腹腔注射注射扑热息痛溶液模型组，可见明显的脂肪变性，病理切片呈空泡状；肝小叶结构破坏明显，肝细胞肿胀,存在散在灶性坏死，炎性细胞浸润较多；肝细胞索模糊。灌服水飞蓟粗提物，脂肪变性明显减轻，并且肝小叶结构完整，炎性细胞大量减少，组织结构破坏较轻。
3. 讨论
扑热息痛在体内经肝细胞色素P-450代谢,绝大部分产物与硫酸和葡葡糖醛酸结合,仅很少一部分生成毒性中间产物(N-乙酰-对-苯醌亚胺,NAPQI),与肝内GSH结合,以巯基复合物形式从尿中排出。在其摄入量超过机体代谢限度时,有毒代谢产物未能及时处理,就与肝细胞膜结合,引起细胞膜脂质过氧化反应,破坏细胞内钙离子平衡,导致细胞死亡,造成肝损伤[5]。
腹腔注射扑热息痛后，模型组肝体重指数、AST含量、GSH含量、MDA含量与正常组之间均有显著差异，说明扑热息痛对肝组织造成了较大损坏，可以作为研究药理性肝损伤的模型。
水飞蓟在肝炎的治疗中应用广泛，主要利用其难溶于水的成分水飞蓟素。水飞蓟素具有抗自由基活性、抗脂质过氧化作用、抑制NO的产生、抗GSH的排空作用、保护肝细胞膜、促进肝细胞修复、再生和抗肝纤维化作用[9]。由于具有强的抗氧化性活性，水飞蓟素是一种重要的保肝药物。
水飞蓟煎剂对扑热息痛所致肝损伤后的肝体重指数、ALT、AST、MDA和GSH有改善作用。各治疗组肝体重指数减少，水飞蓟煎剂能缓解扑热息痛引起的肝肿大，减轻肝脏的损伤。当肝细胞膜受到伤害时，ALT、AST被释放进血液，使血清中的含量增加。据报道ALT、AST升高水平与肝细胞损伤程度成粗略平行关系[6]。水飞蓟煎剂能明显降低血清ALT、AST含量，一定程度上修复受损的肝细胞膜。因此肝细胞膜的完整性增加了，血清中的ALT、AST随之减少，从而达到保肝的作用。文献报道，扑热息痛主要是耗竭了肝内GSH而中毒[7]。从本实验结果看来，模型组与正常组之间存在显著差异，与前面的文献结论是一致的。水飞蓟煎剂能使小鼠体内GSH含量增加，因而当小鼠体内扑热息痛经肝P-450代谢活化产生的NAPQI大量增加时，肝内大量的GSH便与之结合，从而增强了肝脏对扑热息痛的解毒功能，使小鼠肝脏损伤减轻，并保护小鼠不发生扑热息痛中毒死亡。MDA是脂质过氧化的最终产物,可严重破坏细胞膜结构,导致细胞肿胀、坏死,含量高低可反应氧化的损伤程度[8]。各治疗组均显著降低MDA含量，说明水飞蓟煎剂有一定抗自由基与抗氧化作用，对扑热息痛所致肝损伤有显著的保护作用。
通过病理组织切片可见，水飞蓟煎剂能改善扑热息痛所致的肝脂肪变性，并且炎性细胞大量减少，肝组织结构相对于扑热息痛模型组有较大的改善，肝细胞肿胀变轻。由试验结果可知，高剂量组的保肝效果优于低剂量组。
由本试验结果可知，水飞蓟煎剂通过修复肝细胞膜，增加体内GSH含量，抑制脂质过氧化反应，来减轻扑热息痛引起的肝损伤，但不能达到彻底的治疗效果。由于水飞蓟素难溶于水，导致煎剂中水飞蓟素含量较少，其作用会受到影响。水飞蓟煎剂具有一定的治疗效果，说明煎剂中存在有保肝成分，有待于进一步研究。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].2005年版一部，化学工业出版社：56.
[2] 苑辉卿,等.水飞蓟素及其复合物的近期研究[J].国外医学中医分册,1996,18(1):3-5.
[3] 徐勇,，马成芳，张荣桂.水飞蓟素工艺探讨[J].中国野生植物资源,1996,(4):34-35.
[4] 徐淑云.药理实验方法学[M].第二版,北京:人民卫生出版社,1991:502
[5] Macrides TA, Naylor LM, Kalafatis N, et al.Hepatoprotective effects of the shark bile salt 5-beta-scymnol on acetaminophen-induced liver damage in mice.Fundam Appl Toxicol,1996,33:31-37.
[6] 张其兰.肝药灵防治实验性肝损伤作用研究[J].中草药,1983，24(10)：535.
[7] Mincnell,et al.J pharmal Exp Ther, 1973，187(1)：211.
[8] 张学武,朴 龙,刘 超,等.珍珠梅水提物对大鼠肝损伤的保护作用[J].世界华人消化杂志,2003,11(10)：1497.
[9] 田静.水飞蓟素抗肝损药理及其复合物的研究进展[J].海峡药学，2004，16（5）：7-9.
