1.合理对症用药。青霉素是广谱抗生素，对多数革兰氏阳性菌杀灭作用较强，对革兰氏阴性菌如大肠杆菌、沙门氏菌等作用较弱，对结核杆菌、病毒等无效，对耐药的葡萄球菌也无效。因此，在临床使用时要对症用药。同时，连续使用青霉素3天以上仍无效果的病症，需要考虑换药。
2.合理间隔用药。青霉素在生物体内经过3～4小时后90%已代谢，而细菌受到青霉素的作用3小时后能再繁殖，且重新繁殖的细菌易产生耐药性。所以，青霉素在临床治疗中要连续使用3～5天，每天要使用2～3次，在症状消失后还需要用药1～2天以巩固治疗。
3.合理联合用药。一是青霉素与氨基糖菌类抗生素可协同作用，如链霉素、庆大霉素等：二是青霉素与丙磺舒、水杨酸类有协同作用；三是青霉素在中性溶液中较为稳定，在临床上最好用注射的中性溶液或生理盐水溶液，必须现用现配，绝对不能与维生素 C、维生素B、碳酸氢钠、阿托晶等混合使用，以免产生混浊，降低药效。
4.合理用药途径。青霉素不耐酸，内服会被胃酸消化酶破坏，故不宜内服。最佳的用药途径是肌肉注射或静脉滴注。有些疾病如创伤（化脓期）蜂窝组织炎或腐蹄病等，需局部用药和全身给药相结合，治疗效果更好。
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