黄连等六味中药对双歧杆菌和大肠杆菌体外生长

   将六味治疗腹泻的常用中药黄连、黄柏、秦皮、白头翁、地锦草、马齿苋煎汁后，各按5%用量加入营养肉汤和20% PTYG液体培养基中，再分别接种双歧杆菌和大肠杆菌，于适宜的条件培养后，进行菌落计数。结果发现：黄连对双歧杆菌的生长略有抑制，但幅度较小；其余各药对双歧杆菌均无明显的抑制作用；而六味中药对大肠杆菌的生长均有明显的抑制作用。?

 

关键词: 中药；大肠杆菌；双歧杆菌；生长?

 

    一般认为，当有害菌在肠道内大量增殖占绝对优势时，会使益生菌的生长受抑制，结果造成肠道菌群异常而引起腹泻。人们已根据黄连、黄柏、秦皮、白头翁、地锦草、马齿苋等六味中药对肠道致病菌有良好的抑制作用，研制出各种制剂治疗肠道疾病。但这六味中药是否会对双歧杆菌等肠道益生菌产生影响，目前的研究报道还较少。并且，过去对病原菌的抑菌试验多采用平皿法，而少见试管法。为此，笔者采用试管法，观察了上述六味中药对大肠杆菌和双歧杆菌在体外生长的影响，以期更加全面地对中药治疗腹泻的机理进行进一步地探索。

 

1 材料与方法?

 

1.1 材料?

1.1.1 中药  黄连( Coptis Chinensis  anch)、黄柏(〖WTBX〗Phellodendron Chinense Schneid)、秦皮(Cortex Fraxini Caulis)、白头翁(amenone)、地锦草(Herba Euphorbiae Hunifusae)、马齿苋(Portulaca Oleracea L.)，由本院中药实验室提供。?

1.1.2 菌种 大肠杆菌(E. Coli〖WTBZ〗)、短双歧杆菌(B.Breve )、青春双歧杆菌(B. adolescentis)为本实验室保存菌种，均经中国科学院微生物研究所鉴定。1.1.3 培养基 PTYG培养基、营养肉汤，按有关文献配制。20%PTYG培养基，是将PTYG培养基组分按20%量配制。?

1.1.4仪器  超净工作台、高压蒸汽灭菌锅(上海核子实验仪器厂)；恒温培养箱、SYQ型厌氧培养箱(上海跃进实验器械厂)。?

 

1.2 方法?

1.2.1 中药的制备 将黄连、黄柏、秦皮、地锦草、白头翁、马齿苋六味中药，用纱布分别包扎，分别加水煎汁浓缩至浓度为1 g/ml，放入4 ℃冰箱备用。另将秦皮、黄连、黄柏、白头翁按质量比(8∶3∶6∶8)配合成方，煎成白头翁汤(即经验配方)，浓缩至含药1 g/ml。?

1.2.2 对大肠杆菌生长影响试验 将六味药汁和白头翁汤按0.5 ml剂量分别加入装有9 ml营养肉汤培养基的试管各5支中，另取5支营养肉汤对照管，于115 ℃、30 min灭菌后，将大肠杆菌培养液0?5 ml接种于各试管，于37 ℃温箱中培养18～24 h。后利用营养琼脂培养基作大肠杆菌菌落计数。?

1.2.3 对双歧杆菌生长影响试验  先将双歧杆菌于PTYG培养基中增菌培养，活菌浓度控制在1×10?8/ml。将六味药汁和白头翁汤按0?5 ml剂量分别加入装有9 ml 20% PTYG液体培养基的试管中。另取20% PTYG液体培养基对照管，于115 ℃、30 min灭菌后，将短双歧杆菌、青春双歧杆菌增菌液0?5 ml分别接种于上述试管中，每种作5个平行管，于厌氧培养箱中37 ℃培养48 h后，以PTYG培养基作平板菌落计数。?

 

2 结果?

结果见表1。从表1中可知，六味中药对大肠杆菌的生长均有明显的抑制作用，其中以黄连的抑菌作用最为明显，黄柏次之，其余几味相差不大。另外，白头翁汤中各药均对大肠杆菌有明显抑制作用，但四药合方后对大肠杆菌的抑制作用并未有明显增强。黄连对双歧杆菌的生长略有抑制，但幅度较小；其它几味中药对双歧杆菌的生长没有明显的影响。

表1 中药对大肠杆菌和双歧杆菌生长的影响(CFu/ml)

菌株 对照    黄连     黄柏    秦皮   白头翁   马齿苋   地锦草     白头翁汤

大肠杆菌  1.6×10⁹  1.1×10⁶ 9.8×10⁶ 1.7×10⁷ 2.5×10⁷ 2.2×10⁷     2.3×10⁷ 1.2×10⁷

短双歧杆菌2.4×10⁷ 1.2×10⁷ 1.8×10⁷ 1.8×10⁷ 2.0×10⁷  2.1×10⁷  2.2×10⁷1.8×10⁷

青春双歧杆菌4.3×10⁷ 1.7×10⁷ 3.5×10⁷ 3.7×10⁷ 4.0×10⁷ 4.0×10⁷ 4.5×10⁷ 3.5×10⁷

 

3 讨论?

3.1 据报道，通过平皿试验得知，白头翁汤合剂中四药的抗菌作用以黄连、秦皮为强，黄柏次之，而白头翁最弱。但本试验所得结果为黄连最强，依次为黄柏、秦皮、白头翁。由于时间仓促，我们没有验证六味中药平皿抑菌试验的结果，因此，还有待于比较两方法的差异，查明两方法得出不同结果的原因。此外，由于条件所限，本实验仅采用5%的加药量，其它浓度加药量效果如何，仍有待于进一步研究。?

3.2 有研究报道，白头翁汤中各药无协同或拮抗作用，且白头翁汤中去掉黄连后仍有较好的抑菌作用。本次体外实验结果也显示：白头翁汤对大肠杆菌的抑制作用与单药相比未见有显著增强，而临床经验证明使用白头翁汤比仅使用其中一种药的疗效要好，原因可能是天然药物所含的多种成分与机体发生复杂的反应，结果造成临床效果与体外实验结果的差异。?

3.3 据资料记载，一些中药(如黄芪、党参、枸杞)可以促进肠道益生菌(如双歧杆菌、乳杆菌)的生长，充当益生元的作用。它们通过促进双歧杆菌生长，抑制大肠杆菌生长而治疗腹泻。但本实验结果显示：此六味中药在体外可明显抑制大肠杆菌生长，但并不同时促进双歧杆菌的生长，除黄连对双歧杆菌略有抑制外，其它几味中药对双歧杆菌生长均无影响。这说明此六味中药治腹泻是通过直接抑制大肠杆菌的生长而起疗效的，对双歧杆菌并无多大影响。由此可知，以上六味中药用于治疗腹泻可避免将肠道有益、有害菌一同杀死，而引起肠道菌群失调，这也是中药治腹泻的优势。?

3.4 双歧杆菌和大肠杆菌不是孤立地生长于肠道中，它们与众多肠道菌一起存在于肠道的微生物区系中，这些微生物与动物机体有共同作用，如机体厌氧和供氧条件的变化会引起菌群之间数量的变化。因此，上述两菌在机体内处于一种复杂的生态环境中，体外实验结果不能完全反映体内菌群变化。若要确切、详细了解体内实际效果，仍需进一步研究。