卡罗莱纳箱龟在人们的注视中不断减少种群数量，提醒人们保护龟种的重要性，当然，影响野外生存龟数量的主要因素在于环境的变化，同时也与人们的捕杀有很大的关系。
卡罗莱纳箱龟主要生活在陆地上，昼出夜伏，雨后也较容易寻到其踪迹。它们是杂食动物，会在枯叶、原木以及一些哺乳动物的巢穴附近觅食，有时甚至会吃动物腐尸。
在温暖的夏季，卡罗莱纳箱龟会出现在沼泽地带边缘，其原因可能是为了避暑降温。当体温过高（大约超过32℃）时，会分泌出唾液涂抹在肢体及头部，通过蒸发作用来降温。对于无法触及的后肢，它们会通过小便来达到相同的目的。
卡罗莱纳箱龟的繁殖季节是春季。在交配之后，精子可以在雌龟体内存留四年之久，因此并不需要每年都交尾。在五月、六月或七月间，雌龟会在瓶行的坑洞中产下1至11枚卵。经过70至80天孵化，幼龟就可以破壳而出。在北部地区，十月至十一月间卡罗莱纳箱龟会进入冬眠期，地点则一般选在沙、泥底的溪流和池塘底部。这种龟尤其长寿，曾有活到138岁的记录。
