三线闭壳龟的性成熟年龄因性别的不同而有差别。野生的雌性龟，性成熟年龄为6～7龄，体重1250～1500克；雄性龟性成熟年龄为4～5龄，体重700～1000克。在人工饲养条件下，由于饲料营养丰富，龟的体质好，生长速度加快，性成熟提前。雌性龟性成熟年龄为5～6龄，体重为1500～2000克；雄性龟性成熟年龄为3—4龄，体重1000～1500克。
交配 每年的秋季和春季，气温在20～28℃，水温在16～25℃之间，三线闭壳龟进行交配。在交配季节，由于龟类缺少发声器，雄、雌性龟各自分泌一种特殊的气味，互相招引对方。发情期，雄性先行熄戏追逐雌性龟，并围绕雄性龟打转，用头部触动罐龟的头部、肩部，有的维龟咬住雕龟的头颈，雄龟则将壳闭合，有时2只雄龟共同追逐1只雌龟，发生维龟之间角斗，履者边离。开始时，膘龟对维龟的举止并不感兴趣，也不予理睬，但时间一长，雌龟也能接受雄龟。当雌龟原地不动时，说明雌龟已接受雄龟。雄龟爬到雌龟的背上，用前肢、后肢分别钩住雌龟的背甲前缘、后缘，交接器插入雌龟的泄碴腔孔内进行交配，持续时间长达3～5分钟。交配时多在水中进行，且在浅水地带。
产卵 三线闭壳龟的产卵季节为每年的5～9月，气温达25～5℃，也有冬季产卵的现象，但均末受精。性成熟的雌龟，卵巢内终年都有大小不等的卵教存在。在产卵季节，龟一年产卵一批，少数个体大的龟院产2次卵。龟产卵多在夜间进行，上岸后选择沙质松软的地方，先挖窝后产卵，初产卵的龟每窝产卵1～2枚，一般产卵数量为5～7技。卵呈白色，长糟圆形。卵长径40～55毫米，短径24～33毫米，卵重18～35克。
